Calcein AM/PI Double Stain Kit 活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
FS1161-500T | Calcein AM/PI Double Stain Kit 活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒 | 500T | 1050.00 |
活/死細(xì)胞雙染試劑盒(熒光探針細(xì)胞染色)活/死細(xì)胞雙染試劑盒(熒光探針細(xì)胞染色)
試劑盒組分
編號(hào) 組分 保存方法 產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格
FS1161-500T FS1161-1000T
FS1161-A Calcein AM Solution (4mM) -20ºC避光 50μl 50μl×2
FS1161-B PI Solution(1.5 mM) -20ºC避光 200μl 200μl×2
FS1161-C 10×Assay Buffer -20ºC~4℃ 50ml 100ml
產(chǎn)品描述
本鈣黃綠素AM/碘化丙啶雙染試劑盒(Calcein AM/PI Double Stain Kit),包含鈣黃綠素AM和碘化丙啶兩種熒光染料,用于對(duì)活細(xì)胞和死細(xì)胞的同時(shí)染色,即是常稱的活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒(Live/Dead Cell Double Staining Kit)。
試劑盒工作原理在于:Calcein AM(鈣黃綠素乙酰甲酯),CAS 48504-34-1,一種具高度親脂性和細(xì)胞膜滲透性的活細(xì)胞熒光染料。本身不具熒光,一旦進(jìn)入細(xì)胞后,被細(xì)胞內(nèi)酯酶水解生成鈣黃綠素(calcein),產(chǎn)生亮綠色熒光(Ex/Em= 490nm/515nm)。因此,Calcein AM僅對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色。另一方面,碘化丙啶(PI),一種細(xì)胞核染料,不能穿透完整的活細(xì)胞膜。只能穿透死細(xì)胞的不規(guī)則區(qū)域進(jìn)入細(xì)胞核,然后嵌入DNA雙螺旋區(qū)域,產(chǎn)生紅色熒光(Ex/Em= 535nm/617nm)。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激發(fā),因此可用熒光顯微鏡同時(shí)觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞。而用545 nm激發(fā),僅可觀察到死細(xì)胞。結(jié)合這些特點(diǎn),Calcein, AM和PI經(jīng)常被結(jié)合用作活細(xì)胞和死細(xì)胞的雙重染色。
注意事項(xiàng)
1)由于Calcein-AM對(duì)濕度非常敏感,若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后,必須緊緊密封蓋子。建議根據(jù)單次用量,分裝密封保存。Calcein-AM工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
2)碘化丙啶(PI)有一定的致癌性,操作時(shí)一定要注意防護(hù)。若接觸到皮膚,需要立即用自來水清洗。
3)為了您的an全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、試劑準(zhǔn)備
1.1 1×反應(yīng)緩沖液(Assay Buffer)的配制
從低溫冰箱內(nèi)取出10×Assay Buffer,根據(jù)單次用量無菌條件取出適量,用去離子水(dH2O)做10倍稀釋以得到1×Assay Buffer。
1.2 1×染色工作液(Stain Buffer)的配制
1) 先將低溫保存的Calcein AM溶液 (4 mM)和PI溶液(1.5 mM)室溫回溫至少20min,使其充分融化?!咀⒁猓?次使用時(shí)建議對(duì)儲(chǔ)存液根據(jù)單次用量分裝,特別是Calcein AM,以減少反復(fù)凍融次數(shù)?!?br />二、染色步驟
常見問題
1、該試劑盒適用任何細(xì)胞類型?
基本上適用于任何含酯酶活性的動(dòng)物細(xì)胞。植物和xi菌細(xì)胞因含有細(xì)胞壁,Calcein-AM不能進(jìn)入因此無法染色。有可能對(duì)原生質(zhì)體進(jìn)行染色。
2、用相同濃度有可能對(duì)所有哺乳動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行染色?
對(duì)所有細(xì)胞都用相同的濃度是很不合理的。Calcein-AM和PI的zui加工作濃度根據(jù)細(xì)胞類型差異很大。有必要根據(jù)具體細(xì)胞來確定zui價(jià)染料濃度。參考說明書染料工作濃度優(yōu)化方法。
3、Calcein-AM對(duì)細(xì)胞有毒?
與其他相似的活細(xì)胞染料比較,Calcein-AM基本無毒(毒性zui?。?。見文獻(xiàn)EL.S.D.Clerck,et.al., J.Immunol.Methods, 172,115-124(1994)
4、 試劑盒如何保存?
密封-20℃保存。Calcein-AM遇潮會(huì)水解,因此直至管子溫度達(dá)到室溫后才能開蓋。使用后擰緊蓋子。用緩沖液或者培養(yǎng)基稀釋后的染色工作液需即刻使用。不能保存后使用。